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Doch schnell zeigt sich, dass der Tod keine Einmischung duldet. Bald darauf - alle haben sich zunächst getroffen und sich gegenseitige Unterstützung zugesagt - kommt einer der Überlebenden durch eine bizarre Kettenreaktion bei einem Feuer in seiner Wohnung ums Leben, wenig später stirbt der 15-jährige Sohn einer Witwe auf dem Vorplatz eines Ärztehauses durch eine zu Boden fallende Glasscheibe. Beide Opfer überlebten den Unfall auf dem Highway. Um dem Tod zu entrinnen, sucht Kimberly Rat bei Clear Rivers, die einst die Katastrophe des Fluges 180 überlebt hat (siehe Final Destination). Gemeinsam versuchen die verbleibenden Menschen, die durch Kimberlys Vision gerettet wurden, dem Tod zu entkommen. Dennoch stirbt kurz darauf die Mutter des Teenagers, als ihr Kopf sich in einer Fahrstuhltür verklemmt und abgetrennt wird, als der Fahrstuhl sich in Bewegung setzt.

Die anderen Überlebenden erfahren, dass sie den Tod nur besiegen können, wenn „neues Leben" geschaffen wird. Sie finden heraus, dass es eine schwangere Frau namens Isabella gibt, die den Unfall auf der Autobahn ebenfalls überlebt hat. Indem sie sie zunächst in Haft nehmen lassen, wollen sie verhindern, dass Isabella stirbt, bevor sie ihr Kind zur Welt bringt. Als in der Zelle jedoch ihre Fruchtblase platzt und ein Polizist sie ins nächste Krankenhaus bringt, geht die Aneinanderreihung der tödlichen Kettenreaktionen weiter. Das Auto der restlichen Überlebenden und das des Polizisten mit Isabella stoßen fast zusammen. Die Überlebenden schaffen es, das Auto auf einem Farmgelände zum Stehen zu bringen. Dort stirbt zunächst Claire, die eingeklemmte Fahrerin des Wagens, als der Airbag ihren Kopf in eine Stahlstange treibt. Kurz darauf stirbt Rory, ein weiterer Überlebender, als die Explosion eines angerückten Kamerawagens, der Benzin verliert, ein Stück Stacheldrahtzaun in die Luft befördert, welches ihn zerteilt.

Als die schwangere Isabella ihr Kind zur Welt bringt, glauben sie, dem Tod entkommen zu sein. Doch es stellt sich heraus, dass Isabella die Karambolage ohnehin überlebt hätte und nur zufällig vor Ort war. Bevor sie eingreifen können, sterben der letzte außenstehende Überlebende, einer namens Eugene, der bei dem Crash auf dem Farmgelände verletzt wurde, und Clear Rivers, die Protagonistin des ersten Teils, in einer gigantischen Explosion, als sich Gasbehälter im Krankenzimmer von Eugene entzünden. Als Kimberley eine neue Vision hat, in der sie sich selbst ertrinken sieht, begreift sie den Plan des Todes, stürzt sich mit einem Van in einen nahegelegenen See und stirbt. Allerdings wird sie kurz darauf wiederbelebt, dennoch ist der Tod offenbar besiegt.

Ihren Sieg feiern sie bei dem Farmer, der ihnen bei dem Unfall auf seinem Feld geholfen hatte. Der Farmer berichtet Kimberly und Burke, dass Rory kurz vor seinem eigenen Tod seinem Sohn Brian das Leben gerettet hatte. Noch ehe Kimberley und Burke begreifen, dass zu diesem Zeitpunkt eine neue „Todesschleife" begann, die sich aber lediglich auf den Sohn des Farmers beschränkt, stirbt dieser vor ihren Augen am Grill, als dieser explodiert. In der letzten Szene sieht man die Farmersfrau schreiend auf einen Arm ihres Sohnes blicken, der auf ihrem Teller gelandet ist.

Danach setzt der Film direkt dort an, wo Saw III und Saw IV geendet haben. Agent Strahm, der von Detektive Hofmann zusammen mit der Leiche von Jigsaw und Amanda eingesperrt wurde, findet eine Geheimtür. Dort findet er ein Tonband, das ihm sagt, dass er aufhören soll, nach dem Verbündeten von Jigsaw und Amanda zu suchen. Kurze Zeit später wird er entführt und findet sich in einer Falle wieder. Sein Kopf befindet sich in einem Behälter, der mit Wasser gefüllt wird. Strahm kann sich nur retten, indem er sich einen Kugelschreiber in die Luftröhre sticht und somit wieder atmen kann.

In der Zwischenzeit trifft die Polizei beim Gideon-Gebäude ein. Hofmann kommt zusammen mit der Tochter von Jeff und Lynn (das Mädchen, das in Saw III am Ende eingesperrt ist) heraus und Strahm wird von den Sanitätern gerettet. Kurze Zeit später sieht man, wie die Polizei verkündet, dass die Jigsawmorde vorbei sind.

Als Hofmann Agent Strahm in Krankenhaus besucht, erfährt dieser, dass Agent Perez gestorben ist und ihre letzten Worte „Detektive Hofmann" waren. Strahm glaubt nun mehr als je zuvor, dass Hofmann der Helfer von Jigsaw ist. Kurze Zeit später erscheint Detektive Erickson und gibt Strahm einen Brief, in dem steht, dass er nicht mehr an dem Jigsawfall arbeitet, worüber dieser wenig erfreut ist. Inzwischen hat Jill, Johns Ex-Frau, einen Termin bei einem Nachlassverwalter, der ihr ein Abschieds-Video sowie eine Truhe von John übergibt. Jill kann diese Truhe mit Hilfe eines Schlüssels öffnen, den sie an einer Halskette trägt, der Inhalt bleibt jedoch geheim.

Agent Strahm versucht auf eigene Faust, Hofmann zu überführen. Dabei stößt er darauf, dass Hofmanns Schwester ermordet worden ist. Der Mörder war Seth (Person in der Pendelfalle). Hofmann hat Seth folglich in eine Falle gesteckt - zeitlich noch vor Saw - und es so aussehen lassen, als wäre Jigsaw der Schuldige. Dies findet jedoch auch Jigsaw sehr schnell heraus und er entführt Hofmann. Dabei sieht man in Rückblenden, wie John Hofmann dazu überredet, ihm zu helfen und wie die beiden ihre erste Falle, diejenige mit dem Stacheldraht in Saw, aufbauen. Weiterhin sieht man, wie beide das Spiel aus Saw II aufbauen und in Saw III kurz vor Lynns Spielbeginn eine „Lagebesprechung" abhalten.

Während Agent Strahm weiterhin versucht Beweise für Hofmanns Schuld zu finden, wachen fünf Menschen in einem verlassenen Keller auf, die Hälse an Drahtseilen festgebunden. Jigsaw sagt in einem Videoband, dass sie alle zusammenarbeiten müssen, um zu überleben. Sie haben jeweils immer 15 Minuten in jedem Raum Zeit, bevor eine Bombe detoniert. Um sich von den Halsketten zu befreien müssen sie Schlüssel holen, die jeweils vor ihnen in einem Gefäß hängen. Aber es kann immer nur einer nach vorne gehen, wobei die anderen etwas stranguliert werden, da die Drahtseile miteinander verbunden sind. Die Aufgabe schaffen nur vier der Personen. Im nächsten Raum müssen sie wiederum Schlüssel organisieren um Schächte zu öffnen, die sie vor der Explosion schützen. Dabei stirbt ein weiteres Opfer. Im dritten Raum müssen sie fünf Stromkreise schließen, indem sie ein Kabel mit Wasser in einer Badewanne verbinden. Jedoch sind die Kabel zu kurz, wobei eine weitere Testperson umgebracht wird und als Leiter genommen wird. Im letzten Raum schließlich müssen die beiden letzten Kandidaten ihre Hände in eine Apparatur stecken, die diese auseinandersägt, damit Blut herausfließt. Das Blut wird in ein Gefäß gesammelt, das, sobald es voll ist, die Tür öffnet. Nun erkennen die Opfer, dass sie die ganze Zeit einen Fehler begangen haben. So hätte es im ersten Raum gereicht, wenn einer einen Schlüssel geholt hätte, da alle das gleiche Schloss hatten. Im zweiten Raum hätten sich zwei Menschen in einen Schacht quetschen können, um der Explosion zu entgehen. Im dritten Raum hätte einfach jeder das fehlende Stück zwischen Badewasser und Stromkabel sein müssen, so hätte jeder nur einen kleinen Schlag bekommen und im letzten Raum hätte sich jeder nur ein kleines bisschen „Ansägen" müssen, ohne sich lebensgefährlich zu verletzten. Jedoch müssen die letzten beiden jetzt ihre Hände viel tiefer in das Sägegerät stecken, um die nötige Menge Blut zu erhalten. Beide schaffen es die Tür zu öffnen, ob sie jedoch überleben bleibt unklar.

Derweil findet Agent Strahm heraus, wo Hofmann sich versteckt hat und folgt ihm. Agent Strahm hingegen wird bereits von Detektive Erickson verfolgt, der so ebenfalls ins Versteck von Hofmann gelangt. Strahm findet im Versteck einen Raum, indem sich ein Glassarg (tauchte bereits in Saw IV auf) befindet. Im Glassarg liegt ein Tape, dass Strahm anhört. Darauf teilt ihm Hofmann mit, dass er wieder einmal das gefunden hat, wonach er gesucht hat. Er fragt ihn, ob er etwas auf seiner Entdeckungsreise gelernt hätte und ob er ihm nun vertraue. Seine einzige Möglichkeit, den Raum zu überleben, sei es, in die Glasbox vor ihm zu steigen und die Schmerzen zu verkraften. Strahm schaltet dann das Tonband ab, da er von einem Geräusch gestört wird.

Währenddessen findet Detektive Erickson eines der Opfer, das sich die Hand zersägt hat, und ruft den Notarzt. Auch entdeckt er Strahms Handy und Aufzeichnungen über sich selbst.

Im anderen Teil des Gebäudes betritt Hofmann den Raum, in dem eben noch Strahm das Tape angehört hat und findet dieses auf dem Boden liegend. Kurz darauf wird er von Strahm angegriffen und beide kämpfen. Strahm schafft es, Hofmann in den Glassarg zu schubsen und diesen zu schließen. Detektive Hofmann zeigt dann auf das Tape, was Strahm zu Ende hören soll. Darauf hört Strahm, falls er sich entscheidet, den Anweisungen nicht zu folgen, würde er niemals gefunden werden, weil er einfach verschwinden werde. Hofmann erklärt ihm, es sei sein Vermächtnis, dass Strahms werden wird. Jetzt erkennt Agent Strahm, dass er nur dazu verwendet wird, ihm die Schuld in die Schuhe zu schieben. Hofmann hat alles dafür getan, dass die Polizei glaubt, er wäre der Helfer von Jigsaw. In der Zwischenzeit telefoniert Detektive Erickson bereits mit seiner Polizeibehörde und lässt einen Haftbefehl für Strahm ausstellen. Bei Agent Strahm und Detektive Hofmann setzt sich die letzte Falle in Bewegung, und zwar beginnen sich die Wände des Raumes unaufhaltsam zusammenzubewegen. Hofmann wird dabei im Glassarg nach unten in eine im Boden eingelassene Luke gefahren. Strahm versucht noch die Wände aufzuhalten, wird jedoch letztendlich von den Wänden zerquetscht, was von Hofmann mit einem Lachen im Gesicht beobachtet wird.